本發明係在於提供一種鳥類呼吸道上皮細胞培養方法及其培養液，其中，該培養液係至少包含有一家禽胚胎萃取物及胎牛血清。本發明所提供之方法及其培養液係可於體外成功培養初代鳥類呼吸道上皮細胞，並可進行繼代培養至少三代，且該培養出之細胞係用以供鳥類呼吸道疾病病毒之分離、檢測及鑑定使用。